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引入 HPLC 色譜柱的樣品通常多種多樣且復(fù)雜,這些樣品可能含有許多與 HPLC 條件不兼容的成分。在沒(méi)有適當(dāng)?shù)臉悠分苽浠驑悠奉A(yù)處理的情況下注入此類樣品可能會(huì)導(dǎo)致色譜柱堵塞。比如殘留的蛋白質(zhì)和高疏水性化合物(如脂質(zhì))在反相分離過(guò)程中也可能不會(huì)*洗脫出來(lái),它們往往會(huì)慢慢吸附到分析色譜柱上并引起問(wèn)題。
不兼容的樣品稀釋劑和流動(dòng)相也會(huì)導(dǎo)致堵塞問(wèn)題。如果兩者不兼容,當(dāng)將樣品引入流動(dòng)相時(shí),如果稀釋劑與流動(dòng)相兩者對(duì)比極性太強(qiáng),通常會(huì)出現(xiàn)樣品沉淀。
流動(dòng)相緩沖液通常用作 HPLC 中的流動(dòng)相,重要的是在使用前過(guò)濾這些緩沖鹽。有時(shí),由于實(shí)驗(yàn)室溫度的不同,一些緩沖液成分容易沉淀,又或者使用過(guò)高濃度的緩沖液也會(huì)導(dǎo)致沉淀。
來(lái)自磨損的泵密封件或其他密封件的碎片,長(zhǎng)期使用總會(huì)發(fā)生磨損,這些組件往往會(huì)在溶劑管路中產(chǎn)生一些碎屑或者金屬離子等。如果不對(duì)泵和進(jìn)樣口進(jìn)行定期維護(hù),雜質(zhì)往往會(huì)到達(dá)色譜柱篩板并堵塞色譜柱。
現(xiàn)在我們知道了液相色譜柱被阻塞的問(wèn)題,我們?nèi)绾伪Wo(hù)它?為了保護(hù) HPLC 色譜柱(分析型和制備型)免受污染,例如進(jìn)樣中的微粒、未過(guò)濾的流動(dòng)相組分或進(jìn)樣器磨損的泵密封/轉(zhuǎn)子密封的碎片,建議使用色譜保護(hù)柱。
保護(hù)柱本質(zhì)上是一個(gè)微型色譜柱,理想情況下填充與分析柱相同的填料,并連接在分析柱之前。恒譜生有各種尺寸以匹配不同型號(hào)的高效色譜柱的要求。保護(hù)柱中的篩板與分析柱中的篩板類似,這意味著任何可能阻塞分析柱的東西都會(huì)被保護(hù)柱阻塞。然后可以通過(guò)簡(jiǎn)單地更換保護(hù)柱或者保護(hù)柱篩,從而延長(zhǎng)分析柱的使用壽命。
如何挑選合適的恒譜生保護(hù)柱?保護(hù)柱的填充材料(固定相)應(yīng)與分析柱的填充材料相同,以使選擇性不會(huì)發(fā)生變化。保護(hù)柱的 ID 應(yīng)與分析柱的 ID 相同或小于分析柱的 ID,以盡量減少增加的譜帶展寬。始終使用 ID 接近色譜柱 ID 的防護(hù)裝置。保護(hù)柱的長(zhǎng)度應(yīng)盡可能短以避免額外的死體積,可以選擇恒譜生直連保護(hù)柱,直接連接UHPLC和UPLC色譜柱,省去中間的連接管路和接頭螺絲,消除溶劑泄露問(wèn)題與連接死體積,日常操作使用更方便簡(jiǎn)潔、更易于操作。