分析保護(hù)柱是液相色譜分析中重要的色譜耗材,使用保護(hù)柱可大大降低分析柱受污染的程度,延長(zhǎng)分析柱使用壽命。
保護(hù)柱位于進(jìn)樣器與分析柱之間,作用主要兩方面:
1.截留不溶性顆粒
2.吸附樣品基質(zhì)中的雜質(zhì)
以下幾種情況建議使用保護(hù)柱:
1.中藥、天然產(chǎn)物及合成中間體等基質(zhì)較復(fù)雜的樣品分析——因溶解性差異導(dǎo)致樣品析出而污染分析柱的情況比較嚴(yán)重,梯度洗脫時(shí)影響更大。
2.生物樣品分析——因樣品的不可逆吸附導(dǎo)致的污染,保護(hù)柱可先于分析柱承受這種污染,從而延長(zhǎng)分析柱壽命。
保護(hù)柱很重要,但選擇合適的保護(hù)柱更重要,選擇或使用不當(dāng)也可能帶來(lái)截然相反的效果。
分析保護(hù)柱分類及選擇:
從材質(zhì)上分:不銹鋼材質(zhì)和PEEK(聚醚醚酮)材質(zhì)
PEEK材質(zhì)優(yōu)缺點(diǎn)——樣品對(duì)金屬離子比較敏感時(shí),選擇PEEK材質(zhì)比較合適,比如某些蛋白分析會(huì)用到PEEK材質(zhì)的分析柱,主要就是考慮到這方面的因素;
不銹鋼材質(zhì)優(yōu)缺點(diǎn)——大部分小分子化合物的分析,選擇不銹鋼材質(zhì)保護(hù)柱居多,特別是當(dāng)流動(dòng)相體系使用到四氫呋喃(THF)或DMSO等一些溶解性較強(qiáng)的溶劑時(shí),必須選擇不銹鋼材質(zhì),甚至對(duì)于HPLC系統(tǒng)的管路也需要替換成不銹鋼材質(zhì),因THF對(duì)于PEEK管路有相當(dāng)強(qiáng)的腐蝕作用。
從結(jié)構(gòu)上分:卡套式(柱芯+柱套)和直接填裝短柱
直接填裝短柱優(yōu)缺點(diǎn)——這種結(jié)構(gòu)的保護(hù)柱實(shí)質(zhì)就是短的色譜柱,一般填裝的填料跟分析柱填料*一樣。生物樣品分析中,用這種類型保護(hù)柱居多,除可過(guò)濾一些不溶顆粒外,還可除去一些在分析柱上易吸附的雜質(zhì)。缺點(diǎn)是,一次性使用,污染嚴(yán)重時(shí),只能報(bào)廢。
卡套式保護(hù)柱優(yōu)缺點(diǎn)——卡套式保護(hù)柱的柱套可反復(fù)使用,柱芯污染后可替換,廠家會(huì)提供配套的保護(hù)柱芯,但購(gòu)買時(shí)需要注意,柱芯中有與分析柱匹配的填料,需要確認(rèn)柱芯中的填料類型再購(gòu)買。同時(shí),柱芯和柱套需是來(lái)源于同一廠家的同一規(guī)格,否則,會(huì)存在匹配上的差異,導(dǎo)致峰型異?;蛘呗┮?。
從連接方式上分:獨(dú)立式和直連式
獨(dú)立式分析保護(hù)柱優(yōu)缺點(diǎn)——保護(hù)柱和分析柱之間用一段管路連接,不用擔(dān)心與分析柱在連接上的匹配問(wèn)題。但使用管路連接時(shí),連接不當(dāng)容易產(chǎn)生死體積。
直連式保護(hù)柱優(yōu)缺點(diǎn)——保護(hù)柱接口帶螺紋,可直接與分析柱連接,死體積小,UPLC分析時(shí)建議選擇直連式保護(hù)柱;缺點(diǎn):購(gòu)買時(shí)需保證接口與分析柱匹配。