1.高壓勻漿法裝填
液相色譜柱將填料懸浮在適宜的勻漿液中制成勻漿,在其尚未沉降之前,很快以高壓泵將其以很高 的流速壓進(jìn)柱中,便可制備出填充均勻的柱子。這是常見(jiàn)的分析和制備色譜柱的裝填方法。
2.濕法裝填
對(duì)于柱、特別是現(xiàn)在流行的以3-10μm細(xì)柱徑填料填裝的分析柱,則必須使用濕法,即勻漿法裝柱。因?yàn)椋S著粒徑的縮小,因靜電作用和表面能的加大,粒子間傾向于聚集和“粘結(jié)”,若以干法填裝,它們會(huì)粘附在連接管及柱壁上,也會(huì)因強(qiáng)烈的靜電作用彼此排斥,因而難以填裝出均勻而緊密的柱床。這樣,必須改以濕法裝填,即將填料懸浮于適宜的液體中消除上述不良作用。但是,在固 - 液系統(tǒng)中仍然存在因重力而引起的沉降現(xiàn)象。
3.干法裝填
對(duì)于粒徑較大的填料,可以用干法裝填,其基本方法與填裝氣相色譜柱類似。但需注意的一點(diǎn)是,在干法填裝制備液相色譜柱時(shí),不要過(guò)分劇烈地振動(dòng)和敲打。振動(dòng)和敲打會(huì)使填料因自身粒徑的不均勻性而產(chǎn)生柱子整體上的不均一性,即較大的填料粒子靠近柱壁,而較細(xì)粒徑者則傾向集中于柱中心。這種柱內(nèi)顆粒分布的不均勻性,會(huì)導(dǎo)致柱效的降低。比較好的方法是采用小量多次的方法向柱內(nèi)加入填料,例如每次加入相當(dāng)于3-5mm柱床的填料,裝一點(diǎn)即在實(shí)驗(yàn)臺(tái)或桌面上垂直地輕輕磕幾十下,續(xù)加一些填料后,重復(fù)上述操作,直至填裝完成。
4.等密度法裝填
在HPLC發(fā)展的早期,常采用“等密度法”來(lái)填裝柱。多孔硅膠的骨架密度較高。不同牌號(hào)的硅膠因制法不同而有差異,但多在2.2g/cm3以上。因此,需以高密度溶劑配制密度與硅膠骨架密度相近的混合液。常使用的高密度溶劑為碘代和溴代烷類,再與適當(dāng)比例的其他溶劑相配,配制出具有密度適宜的液體,使填料能呈“失重”狀態(tài)懸浮于勻漿液中,以從容地用高壓泵將其壓入空色譜柱中,制出填裝均勻的色譜柱。
5.高粘度法裝填
液相色譜柱高粘度法,即使用黏度較高的勻漿液體系以阻止顆粒的沉降??梢圆捎靡叶肌⒕垡叶?、甘油以及石蠟油等高黏度液體調(diào)配勻漿液。但是,高黏度導(dǎo)致流體阻力加大,必將延長(zhǎng)裝柱時(shí)間且需使用更高的裝柱壓力,在實(shí)用上很不方便。因此,高黏度法已很少被采用。