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雖然質(zhì)譜聯(lián)用液相色譜已被證明是發(fā)現(xiàn)組學(蛋白質(zhì)組學、脂質(zhì)組學、代謝組學、食物組學和糖組學)領(lǐng)域的強大工具。組學研究經(jīng)常受到樣本復(fù)雜性的挑戰(zhàn)。在處理少量樣品、小體積和復(fù)雜的樣品基質(zhì)(生物流體和單細胞分析)時,對感興趣的分子進行識別和量化可能特別困難。液相色譜柱小型化可以克服這些挑戰(zhàn)。減小色譜柱內(nèi)徑 (ID) 會降低色譜稀釋度并提高靈敏度,從而實現(xiàn)更高效的 MS/MS 采樣,從而實現(xiàn)更多的分子鑒定。
當樣品量被注入色譜柱并被周圍的溶劑稀釋時,就會發(fā)生這種稀釋。在這種情況下,更少的溶劑意味著更少的色譜稀釋,這是使用更小的內(nèi)柱直徑的結(jié)果。色譜稀釋度的降低會導(dǎo)致離子靈敏度的提高,從而實現(xiàn)更有效的 MS/MS 采樣,從而實現(xiàn)更多的分子鑒定。恒譜生新推出10#x20空柱管總成,具有較小內(nèi)徑的小型化液相色譜柱可提高靈敏度。
從理論上講,將色譜柱內(nèi)徑從 2.1 mm 縮小到 0.300 mm 會導(dǎo)致樣品濃度增加 49 倍,這將轉(zhuǎn)化為靈敏度提高 49 倍。實際上,情況并非總是如此,靈敏度是通過離子強度測量的,離子強度取決于樣品濃度以外的其他因素,例如分析物的電離性質(zhì),以及 LC-MS 設(shè)備(發(fā)射器類型)和源參數(shù)。
一、 根據(jù)色譜柱類型 (ID),液相色譜中使用的典型流速和樣品裝載量。
二、小型化優(yōu)勢
色譜柱小型化減少了色譜稀釋并大大提高了電離效率,這種組合使納流成為 Omics 領(lǐng)域非常理想的技術(shù),當只有少量樣品可用和/或由于添加非揮發(fā)性溶劑或需要更好的電離時鹽。除了提高靈敏度、更高的 S/N(信噪比)和更低的 LLOQ(定量下限)之外,它還減少了溶劑消耗,從而降低了成本并有益于環(huán)境。同時,隨著流速的降低,有時需要增加梯度長度。梯度長度的增加會降低樣品通量。盡管如此,當需要樣品通量、靈敏度和穩(wěn)定性時,微流是一個很好的中間選擇。
此外,色譜柱堵塞和過載也需要被視為微觀固體,在蛋白質(zhì)組學的情況下,未消化的蛋白質(zhì)會堵塞小 ID 色譜柱,使其無法使用。因此,用戶必須小心在進樣前正確清潔樣品和/或使用捕集(柱前)柱以消除不希望的污染物到達小型柱。當使用捕集柱時,捕集器與柱對齊,樣品被裝入其中,而不需要的顆粒被浪費。一旦樣品被濃縮到捕集阱中并且沒有污染物,它就會被導(dǎo)向色譜柱進行分析。使用恒譜生鬼峰捕集柱有助于避免納米/微米級色譜柱污染并延長色譜柱的使用壽命。鬼峰小柱能夠?qū)⒂袡C相中污染物,水相中污染物,緩沖鹽,流動相瓶和混合過程產(chǎn)生的污染物過濾。
色譜分析柱小型化會帶來許多挑戰(zhàn),但不可否認的是,好處大于這些挑戰(zhàn)。5微流和納流分離帶來全新的生物醫(yī)學進步和基礎(chǔ)科學知識的收獲使其成為一種強大的分析技術(shù)。