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液相色譜對于實(shí)驗(yàn)室分析員來說是容易上手的儀器了,但就算是經(jīng)驗(yàn)豐富的分析員都會經(jīng)常出現(xiàn)錯誤的操作導(dǎo)致液相色譜儀器發(fā)生故障。而這個時候分析員一般就會選擇把色譜柱進(jìn)行反沖這個方法,但恒譜生在這里建議分析員在一般情況下還是不要反沖色譜柱,除非色譜柱有特別說明是可以反沖的。
那么,哪些柱子不能反向沖洗呢?其實(shí)有兩種,一種是兩端柱篩板不一樣是不適合的,因?yàn)槿肟诘哪且欢酥Y板的孔徑比較大會導(dǎo)致固體顆粒物質(zhì)的堵塞,所以一旦進(jìn)行反沖就有可能出現(xiàn)造成填料的流失從而導(dǎo)致分析柱的柱效下降的情況;另一種就是色譜分析柱柱頭塌陷或變型是不宜反沖是,因?yàn)橹^塌陷或變型了會在柱頭上留下縫隙,從而在反沖的時候會導(dǎo)致柱床移動和填料松動。
雖然液相色譜柱不應(yīng)該隨便進(jìn)行反沖,但如果明確知道來自顆粒物堵塞篩板或柱頭污染時,反沖色譜柱是一種補(bǔ)救措施。但反沖前確認(rèn)柱子是否能夠進(jìn)行反沖,反沖的時候要注意以下幾點(diǎn):
1、在把堵塞在入口那一段端的篩板上的污染物沖出來的同時,柱頭的填料可能也會被沖出來造成柱效的降低,甚至色譜柱的報(bào)廢。
2、如果色譜柱出入口篩板孔徑不一致的話,反沖色譜柱就有可能造成填料漏出,柱效降低等
3、根據(jù)自己用的柱子情況分析到底是什么原因堵塞,可以用易溶于污染物的溶劑來清洗。目前較多的是緩沖鹽鹽析造成,可以用大量的水來沖洗。
4、反沖后要把柱子正過來使用,盡量避免長期反復(fù)正反使用。
除了反沖,想要延長色譜柱的使用壽命,可以在分析柱前連接液相保護(hù)柱。保護(hù)柱安裝在HPLC系統(tǒng)的進(jìn)樣閥和色譜柱之間,目的用于保護(hù)色譜柱和延長色譜柱使用壽命。恒譜生液相制備保護(hù)柱為色譜柱提供方便、經(jīng)濟(jì)和有效的保護(hù),延長了液相色譜柱的壽命,保證分析結(jié)果的重現(xiàn)性。隨著使用時間的增加,高效液相色譜柱分離效能下降,柱壓增高,其原因主要是由于色譜柱進(jìn)口段的少量填料被污染引起的,而色譜柱整個柱床并未被破壞,使用色譜柱保護(hù)柱,相當(dāng)于在色譜柱前增加了一段額外的填料,起到了保護(hù)整個UPLC色譜柱的作用。
今天恒譜生分享的知識先到這啦,希望對您的工作有所幫助!