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首先我們要知道UHPLC 是什么,它的全稱是超高效液相色譜(Ultra-High Performance Liquid Chromatography),是色譜分離科學(xué)中的一個全新類別與新技術(shù)。在制造技術(shù)、擴(kuò)散體積和耐受壓力方面進(jìn)行了優(yōu)化,采用小顆粒的固相,增加了分析的通量、靈敏度及色譜峰容量,最大限度的發(fā)揮色譜性能。
色譜儀器作為一種精密儀器,一些不正確的操作或者忽視的實(shí)驗(yàn)步驟,會導(dǎo)致儀器分析效果的不佳,甚至對儀器造成傷害。其中,最多出現(xiàn)的一些柱壓、漂移和峰型異常的問題,比如鬼峰、肩峰、峰型不準(zhǔn)等。
故障1:出現(xiàn)肩峰
可能是樣品濃度太高,有濃度超載的情況。可以用流動相配樣,總的樣品體積小于第一峰的15%。如果樣品溶劑過強(qiáng)則采用較弱的樣品溶劑。也可能是出現(xiàn)了色譜柱塌陷的問題,如果出現(xiàn)了柱塌陷可以更換色譜柱或者打開進(jìn)液端,用和柱填料相同的固定相修補(bǔ)。也可能是由于樣品中有一個和它極性非常接近的物質(zhì),兩者沒辦反*分離,所以就出現(xiàn)了肩峰的狀況。
故障2:出現(xiàn)鬼峰
對于等度色譜來說,出現(xiàn)鬼峰的原因主要是回收流動相、過載和沉淀、流路產(chǎn)生;對于梯度色譜,主要原因是溶液中有雜質(zhì)的情況以及樣品中含蛋白質(zhì)。很多情況下鬼峰的出現(xiàn)都是由于雜質(zhì)顆粒物、蛋白質(zhì)沉淀物和化學(xué)污染物引起的。在市場上有多款產(chǎn)品主要是針對固體顆粒物的攔截,但是對引起鬼峰出現(xiàn)的有機(jī)污染物卻不能起到攔截效果。恒譜生精心研發(fā)出一款鬼峰捕集小柱可以有效吸附去除系統(tǒng)中的極性較弱的雜質(zhì),從而防止系統(tǒng)中的雜質(zhì)峰對目標(biāo)峰的干擾。其安裝在梯度混合器和進(jìn)樣器之間,不僅能夠去除流動相中的雜質(zhì),還可以有效的去除管路和混合器中的雜質(zhì)。
故障3:出現(xiàn)峰拖尾
出現(xiàn)峰拖尾的現(xiàn)象情況有很多,比如樣品進(jìn)樣量過大,或者是樣品濃度太高導(dǎo)致柱超載,這時應(yīng)該降低樣品量,增加柱直徑采用較高容量的固定相。
也可能是死體積或柱外體積過大,色譜柱柱效下降、柱頭塌陷等情況,可以更換合適的色譜柱,或者在色譜柱前加一個保護(hù)柱。恒譜生分析/制備保護(hù)柱可以起到截留導(dǎo)致色譜柱篩板堵塞、柱頭塌陷和柱效下降的化學(xué)物質(zhì)和顆粒物。樣品和流動相的過濾可以維護(hù)保護(hù)柱對化學(xué)污染物的吸附容量,能夠更長時間的維護(hù)柱效。