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任何HPLC或UHPLC柱都是有試用壽命的。正確使用和維護(hù)色譜柱可以延長其使用壽命,有利于該方法的經(jīng)濟(jì)性。重要的是遵循*的色譜慣例,如適當(dāng)?shù)臉悠分苽洌悠窇?yīng)通過0.45µm的膜過濾器進(jìn)行高效液相色譜過濾,通過0.22µm的過濾器進(jìn)行超高效液相色譜過濾);流動(dòng)相的適當(dāng)質(zhì)量/純度(例如,用于等度模式的等度級溶劑,用于梯度洗脫的梯度級溶劑);過濾流動(dòng)相,發(fā)展良好的方法,具有足夠強(qiáng)的洗脫能力,以盡量減少非特定的吸附;與所選色譜柱兼容的溫度、pH值和最大背壓范圍...
先用正己烷-乙腈(99:1)以0.5ml/min的流速?zèng)_10倍柱體積,再依次以相同的流速相同的用量用氯仿、異丙醇、甲醇、甲醇-水(50:50)沖柱子。以0.5ml/min的流速用30倍柱體積的pH11.0的氫氧化鈉(LUNA)水溶液沖柱子(注意pH值切不可超過11.0),立即用水(0.5ml/min的流速,30倍柱體積)沖洗,再換成流動(dòng)相。配制流動(dòng)相時(shí),應(yīng)各組分分別量取,比例較小的組分要精密量取,需調(diào)pH值時(shí)要精密到0.1。反相條件下使用時(shí),要特別注意控制pH值范圍,pH值越...
無論正在利用何種相互作用,液相柱色譜法都分六個(gè)步驟進(jìn)行:柱平衡樣品裝載洗滌洗脫清洗色譜柱再生一、柱平衡:大多數(shù)液相色譜方案從樹脂平衡步驟開始。與目標(biāo)蛋白質(zhì)和所選樹脂相容的緩沖液通過柱子。一種常見的做法是用5-10柱體積(CV)的平衡緩沖液平衡柱。例如,蛋白質(zhì)與疏水相互作用樹脂的結(jié)合在高離子強(qiáng)度下有效。在選擇平衡緩沖液時(shí)也要考慮目標(biāo)蛋白質(zhì)的特性,因?yàn)殡x子強(qiáng)度等緩沖液因素會(huì)受到蛋白質(zhì)穩(wěn)定性的限制;通常,人們會(huì)避免使用會(huì)使感興趣的蛋白質(zhì)變性或阻止其與固定相相互作用的平衡緩沖條件。二...
許多用戶對溶劑梯度洗脫分離后LC色譜柱應(yīng)該重新平衡多長時(shí)間有疑問。在這里,我們展示了對于反相和HILIC分離而言,再平衡周期短的令人滿意的結(jié)果。LC用戶通常會(huì)提出和討論關(guān)于在溶劑梯度洗脫分離后重新平衡LC色譜柱多長時(shí)間的問題。在本文中,我們根據(jù)最近對該主題的研究討論了細(xì)節(jié),并表明即使對于HILIC分離,在兩個(gè)柱體積數(shù)量級的短再平衡周期內(nèi)也可以獲得令人滿意的結(jié)果。一、核心概念在溶劑梯度洗脫模式下使用LC時(shí),必須有一段時(shí)間,通常是在分析結(jié)束時(shí),在溶劑梯度的第一部分中使用的流動(dòng)相流...
高效液相色譜法是提取和純化甜味劑的可靠技術(shù)。在食品工業(yè)中被廣泛應(yīng)用;食品糖的甜味與蔗糖相似,熱量只有三分之二。這種五碳糖存在于許多植物中,但大多濃度較低(約1%),因此提取和純化成本很高。因此,迄今為止,食品糖主要通過化學(xué)方法生產(chǎn),使用催化木糖脫氫。一、在木糖轉(zhuǎn)化中引入HPLC一種有吸引力的替代方法是通過發(fā)酵將生物質(zhì)(例如麥秸)中的木糖轉(zhuǎn)化為食品糖。通過該工藝,甜味劑可以在溫和條件(大氣壓和環(huán)境溫度)下以高產(chǎn)率生產(chǎn),不含有害化學(xué)物質(zhì)。一旦微生物合成了所需的糖醇,就可以通過高效...
溫度的變化會(huì)對色譜分析方法的重現(xiàn)性和色譜柱的壽命產(chǎn)生重大影響。但為什么會(huì)這樣?恒譜生在以下的內(nèi)容將會(huì)為您介紹。一、再現(xiàn)性隨著溫度的變化,液相色譜柱內(nèi)固定相和流動(dòng)相之間的熱力學(xué)會(huì)受到直接影響。在不同溫度下運(yùn)行方法可能會(huì)影響分析物容量因子(k)或分析物在色譜柱上的保留時(shí)間。在升高的溫度下,流動(dòng)相和分析物的動(dòng)能都會(huì)增加。分析物動(dòng)能的增加將導(dǎo)致它們更強(qiáng)烈地移動(dòng)和振動(dòng),并將破壞分子間結(jié)合,即分析物和固定相之間的分離和保留機(jī)制。很多時(shí)候,這會(huì)導(dǎo)致所有分析物更快地從液相色譜柱中流出,從而縮...