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本文的重點是快速液相色譜和高效液相色譜。沒有一種完mei的協(xié)議適合每一種分離目的。因此,建議為您的特定應(yīng)用程序優(yōu)化方法。通過本文中列出的建議以及一些前期閱讀和測試,您將輕松純化您正在尋找的組件。一、快速液相色譜純化使用快速色譜法進(jìn)行純化的缺點是該方法固有的分辨率較低??焖僖合嗌V柱使用更大的粒徑和柱容量,允許使用更多的起始材料,但以分辨率和純度為代價。如果化合物不需要更高的純度,或者如果下一步將進(jìn)行HPLC,這可能是您的選擇。1、確定溶劑系統(tǒng)樣品的純度(即混合物中有多少化合物...
質(zhì)譜(MS)使研究人員能夠研究許多特性,例如樣品的分子量、結(jié)構(gòu)、特性、數(shù)量和純度。當(dāng)與液相色譜技術(shù)相結(jié)合能成為一種強(qiáng)大的分析工具,能夠從復(fù)雜的生物混合物(如牛奶、血清和全脂)中提取有關(guān)一系列化合物的有意義的數(shù)據(jù),包括藥物代謝物、肽和蛋白質(zhì)-細(xì)胞裂解物。一、液相色譜與質(zhì)譜在將樣品引入MS儀器之前,通常通過過濾掉顆粒物、濃縮分析物、脫鹽和通常分離出可能導(dǎo)致背景離子或抑制電離的化合物來制備樣品。大多數(shù)情況下,許多或所有這些步驟都是由HPLC、UPLC系統(tǒng)完成的。樣品制備需要對樣品進(jìn)...
分析保護(hù)柱是液相色譜分析中重要的色譜耗材,使用保護(hù)柱可大大降低分析柱受污染的程度,延長分析柱使用壽命。保護(hù)柱位于進(jìn)樣器與分析柱之間,作用主要兩方面:1.截留不溶性顆粒2.吸附樣品基質(zhì)中的雜質(zhì)以下幾種情況建議使用保護(hù)柱:1.中藥、天然產(chǎn)物及合成中間體等基質(zhì)較復(fù)雜的樣品分析——因溶解性差異導(dǎo)致樣品析出而污染分析柱的情況比較嚴(yán)重,梯度洗脫時影響更大。2.生物樣品分析——因樣品的不可逆吸附導(dǎo)致的污染,保護(hù)柱可先于分析柱承受這種污染,從而延長分析柱壽命。保護(hù)柱很重要,但選擇合適的保護(hù)柱...
UHPLC是一種專門的色譜方法,與HPLC相比,它運行速度更快、分辨率更好并且使用的溶劑更少。UHPLC通過使用填充較小顆粒(通常直徑小于2µm)的較小色譜柱來實現(xiàn)這一點。生物化學(xué)、細(xì)胞和分子生物學(xué)、臨床醫(yī)學(xué)和許多其他領(lǐng)域的研究人員依靠UHPLC從混合物中分離不同類型的分子——無論這些分子是蛋白質(zhì)、肽、代謝物、藥物化合物還是其他化學(xué)物質(zhì)。盡管UHPLC的性能明顯更好,但它并不總是*。在您考慮改用UHPLC時,恒譜生將幫助您區(qū)分重要和不重要的內(nèi)容。一、為什么選擇UH...
制備柱具有各種尺寸,可以實現(xiàn)高分辨率分析和快速的分析。在制備色譜中,達(dá)到高純度、高回收率和高通量的分離十分重要。制備柱主要應(yīng)用在植物化學(xué)、藥物合成、生物化學(xué)等領(lǐng)域的產(chǎn)品的提取及純化工作中。不同的工作領(lǐng)域中組分的制備和純化量的差異較大。在生物技術(shù)領(lǐng)域中,酶的分離是μg級;在天然產(chǎn)物化學(xué)和合成化學(xué)領(lǐng)域中,為應(yīng)對未知成分定性鑒別、結(jié)構(gòu)測定、生物活性測試等要求,需要純化若干mg級的高純物;在藥品和醫(yī)藥學(xué)測試中,需要g級的標(biāo)準(zhǔn)品和對照品;在工業(yè)級提純中,目標(biāo)產(chǎn)物工業(yè)化生產(chǎn)往往需要kg級...
一、分離模式選擇色譜柱的首要任務(wù)是選擇分離模式。分離分子的方法有很多,其中應(yīng)用*泛的包括反相、正相、親水相互作用、離子交換和尺寸排阻HPLC。還有一些不太常見但更專業(yè)的分離模式,例如使用手性固定相或流動相的特定手性色譜。反相色譜柱通常用于非極性或弱極性有機(jī)化合物,它包含非極性固定相(如C18),通常與極性流動相配對。恒譜生C18AQ反相色譜柱在水下?lián)碛?產(chǎn)品的壽命,適于極性較大的物質(zhì)在高水相條件下的分析。但是該方法不適合應(yīng)用于蛋白質(zhì),流動相通常含有低pH值的乙腈或甲醇,可能會...